本文標(biāo)題："氧化物酶體或溶酶體的浮力密度梯度溶液純化實(shí)驗(yàn)"
發(fā)布者：yiyi ------ 分類(lèi): 行業(yè)動(dòng)態(tài) ------
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氧化物酶體或溶酶體的浮力密度梯度溶液純化實(shí)驗(yàn)
差速離心有兩個(gè)問(wèn)題：低回收率和沉淀中小顆粒的污染。例如在第
一步中，在樣品頂端的核至少是最先暴露在低轉(zhuǎn)速下，要運(yùn)動(dòng)最長(zhǎng)
的路徑，因此它們不會(huì)在離心過(guò)程中成為穩(wěn)定沉淀的組分。另外，
小顆粒(如線粒體)，一開(kāi)始緊靠著管子的底部，運(yùn)動(dòng)的路徑最短，
暴露在最高的轉(zhuǎn)速下，會(huì)成為沉淀組分。由于較長(zhǎng)的沉降路徑以及
導(dǎo)致的g。i。與g。。。之間最大差距，使得吊桶式轉(zhuǎn)子中這些問(wèn)
題最為嚴(yán)重。而體積相同的固定角轉(zhuǎn)子沉降路徑更短，推薦用于差
速離心。
小顆粒物質(zhì)對(duì)于沉淀的污染可以通過(guò)“洗滌”過(guò)程來(lái)減少。這
包括將沉淀重懸于勻漿介質(zhì)中再離心，合并兩種上清用于下一輪離
心。有時(shí)候要重復(fù)洗滌。而洗滌過(guò)程又有它自身伴隨的問(wèn)題：除非
進(jìn)行沉淀重懸時(shí)非常輕柔(在寬松配置的Dounce勻漿器中更佳，使
用研杵少許研磨)，否則沉淀中的細(xì)胞器本身會(huì)破碎。這也是相當(dāng)
費(fèi)時(shí)的。
盡管如此，在不少的情況下差速離心是唯一的純化方法，從大
鼠肝臟或牛心臟中制備所謂的“重線粒體組分”就是其中之一。在
這個(gè)例子中，在“對(duì)線粒體友好的介質(zhì)”提供的等滲條件下，能夠
快速地進(jìn)行差速離心以產(chǎn)生一定純度線粒體組分的，對(duì)于保留偶聯(lián)
的氧化磷酸化來(lái)說(shuō)至關(guān)重要。使用密度梯度溶液可以增加純度，但
是時(shí)間的增加，以及由于密度梯度溶液離心時(shí)增加的流體靜壓和高
離心力對(duì)細(xì)胞器的應(yīng)力，都會(huì)嚴(yán)重?fù)p傷線粒體的功能完整性。
僅僅從差速離心根據(jù)顆粒大小來(lái)分離這個(gè)角度來(lái)說(shuō)，它也十分
重要。比如說(shuō)過(guò)氧化物酶體或溶酶體的浮力密度梯度溶液純化就一
直用于輕線粒體組分分離(見(jiàn)實(shí)驗(yàn)方案4．8)排除可能具有相似密度
的較小顆粒。也因?yàn)橥瑯拥脑颍暾母郀柣?fù)合體可以相似
地以50009離心力從肝臟勻漿液中純化出來(lái)。另一方面，勻漿液中
大的快速沉降顆粒除非預(yù)先除去，不然可能干擾用于分離小的低密
度顆粒的淺層梯度溶液。
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