（樣品準(zhǔn)備）將樣品菌液取出后，以 10,000 x g 離心5分鐘，加入預(yù)先準(zhǔn)備的稀釋染液,

　

（染色原理）而稀釋染液的備制是先將染劑套組內(nèi)的兩種核酸染劑，利用兩染劑對(duì)細(xì)胞膜的穿透能力不同來(lái)區(qū)分活菌或死菌，其中SYTO 9能穿透完整或受傷的細(xì)胞膜進(jìn)行核酸的標(biāo)記 ，而propidium iodide 僅能穿透受傷的細(xì)胞膜，且會(huì)與SYTO 9競(jìng)爭(zhēng)核酸標(biāo)記的位置，

　

（染色結(jié)果）使死菌或受傷的菌體染成螢光紅色；活菌則呈現(xiàn)螢光綠色。

　

（染色步驟）將SYTO 9 和 propidium iodide 做等倍體積混合，再取 3 μl 混合染劑至1ml以0.2 μm濾膜過(guò)濾之無(wú)菌的 0.5% NaCl 鹽水溶液稀釋。當(dāng)菌體在黑暗操作染色處理30分鐘后，

　

（觀察計(jì)數(shù)）取菌液置于細(xì)菌記數(shù)器玻片上，至少取五個(gè)以上視野使用螢光顯微鏡觀察照相，細(xì)菌記數(shù)器玻片深度為0.02 mm乘上一視野的表面積求得菌液的體積，再換算計(jì)數(shù)成每毫升菌液中的總活菌數(shù)目